更新日期:2023-12-14
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厂商性质:生产厂家
所在城市:上海市
品牌 | 其他品牌 | 供货周期 | 现货 |
---|---|---|---|
应用领域 | 医疗卫生,生物产业 |
其原理是在末端脱氧核糖核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的作用下,在基因组DNA断裂时暴露出的3´-羟基(3´-OH)末端掺入被Alexa Fluor 488染料标志的dUTP,使凋亡的细胞被标志上绿色荧光,从而可以用荧光显微镜或流式细胞仪检测。
本试剂盒为直接荧光标志法的TUNEL染色,染色步骤简便,应用范围广泛,可用于检测冰冻切片、石蜡切片和培养细胞的凋亡情况。
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装1 | 包装2 |
SJ1272 | TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(Alexa Fluor 488) | 20T | 50T |
● | 说明书 | 一份 |
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒产品组成:
编号 |
组分 |
20T |
50T |
试剂(A) |
50× Proteinase K |
20 ul |
100 ul |
试剂(B) |
10 × DNase I Buffer |
100 ul |
500 ul |
试剂(C) |
DNase I |
20 ul |
100 ul |
试剂(D) |
Equilibration Buffer |
2 ml |
10 ml |
试剂(E) |
5×TdT Enzyme Buffer |
200 ul |
1 ml |
试剂(F) |
Recombinant TdT Enzyme |
20 ul |
100 ul |
试剂(G) |
Alexa Fluor 488-dUTP |
20 ul |
100 ul |
试剂(H) |
dATP |
20 ul |
100 ul |
试剂(I) |
封片剂(含DAPI) |
1.5 ml |
7.5 ml |
保存条件:
-20 ℃保存,一年有效。
操作步骤:
1、样本处理:
a) 石蜡切片:经二甲笨、酒精脱蜡,复水。脱蜡应充分。
b) 冰冻切片:流水冲洗,去除OCT包埋胶后,用纯水洗3次。
c) 细胞飞片:用组织固定液固定后,用PBS洗三次,每次5分钟。1% Triton X-100处理10分钟,用PBS洗三次,每次5分钟。
2、蛋白酶消化
将1ul 试剂(A)50× Proteinase K稀释于50ul PBS中,滴加到组织上,37℃孵育10-20分钟。消化结束后,用PBS洗三次,每次5分钟。
3、阳性对照组织的处理
将组织用DNase I消化,以获得断裂的DNA,即成Tunel染色阳性的对照。阳性对照组织也可以选用小鼠的小肠组织切片。
纯水 |
46 ul |
试剂(B): 10 × DNase I Buffer |
5 ul |
试剂(C): DNase I |
1 ul |
共计 |
50 ul |
将50 ul DNase I消化液滴加于组织上,37℃孵育10-30分钟,消化结束后,用PBS洗三次,每次5分钟。
4、Tunel标志染色:
Tunel标志染色前用50 ul Equilibration Buffer孵育标本5-10分钟。孵育过程中按下表配制Tunel染色工作液。去除标本上的Equilibration Buffer后,直接滴加50ul Tunel染色液,37℃孵育1-2小时,染色结束后,用PBS洗三次,每次5分钟。
试剂(D)Equilibration Buffer |
37 ul |
试剂(E)5×TdT Enzyme Buffer |
10 ul |
试剂(F)Recombinant TdT Enzyme |
1 ul |
试剂(G)Alexa Fluor 488-dUTP |
1 ul |
试剂(H)dATP |
1 ul |
共计 |
50 ul |
5、封片:
每组织上滴加一滴封剂,小心盖上盖玻片,避免产生气泡。用吸水纸吸去多余的封片剂。荧光显微镜下观察。
注意事项:
1、Proteinase K 消化时间需要摸索,冰冻切片 10 min 左右,石蜡切片时间应适当延长。
2、阴性对照体系:配制Tunel染色工作液时用纯水替代TdT Enzyme。
3、悬浮细胞用离心的方法收集细胞,所有反应在离心管中进行,染色结束后,可在荧光显微下观察,也可以用流式细胞仪检测。
4、Tunel标志染色时应注意避光。
5、实验过程中请穿戴手套、实验服等,做好个人防护。
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